Het bedrijf Heineken ontstond op 15 februari 1864 toen de 22-jarige Gerard Adriaan Heineken brouwerij 'De Hooiberg' in Amsterdam kocht.
In 1873 werd de naam van de brouwerij gewijzigd in Heinekens Bierbrouwerij Maatschappij N.V.
Het jaar daarna werd in Rotterdam een tweede brouwerij geopend.
In 1868 werd de Amsterdamse brouwerij vervangen door nieuwbouw op de hoek van de Stadhouderskade en de Ferdinand Bolstraat in De Pijp.
In 1886 ontwikkelde Dr. Elion, een leerling van Louis Pasteur, de Heineken A-gist.
Deze gist vormt nog steeds de basis voor het Heineken bier.
In 1887 schakelde Heineken over op de productie van ondergistend bier.